تولیذ آنتی بادی پلی کلونال علیه قارچ polymyxa betae

بیماری ریشه گنایی چغندر قند (ریزومونیا)، یکی از مهمترین بیماری های ویروسی در چغندر قند می باشد. عـامـل این بیماری ویــروس زردی نکروتیک رگبـرگ چغنـدر قنــد است. قارچ polymyxa betae در ریشه گیاهان آلوده به صورت پارازیت اجباری رشد می کند و به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. شناسائی گیاهان آلوده به قارچ عمدتا بر اساس مشاهده مستقیم اسپور های استراحتی درون بافت ریشه گیاه می باشد. علی رغم سهولت اجرای این روش در شناسائی گیاهان آلوده، انجام مطالعات تکمیلی و کمی جهت مقایسه گیاهان مختلف از نظر میزان آلودگی همواره با مشکلاتی همراه بوده است. در این خصوص روش های مولکولی، از قبیل real time-pcr، و یا روش های سرولوژیکی مانند das-elisa، می تواند مورد استفاده قرار گیرد. با وجود سهولت و قابلیت بالای استفاده از روش های سرولوژیکی در شناسائی بیمارگر های گیاهی، تهیه آنتی بادی های اختصاصی با کارآیی بالا همواره از مهمترین موانع در استفاده از آن بوده است. در این تحقیق تولید آنتی بادی های اختصاصی علیه قارچ p. betae جهت استفاده درآزمون تشخیصی الیزا صورت پذیرفته است. برای شناسائی و انجام مراحل ایمنی زائی از پروتئین gst که در تمام حالات رویشی قارچ موجود است، استفاده گردیده است. بدین منظور ژن gst اختصاصی p. betae با استفاده از آغازگرهای اختصاصی جداسازی و در پلاسمید ptz57r/t همسانه سازی شد و تعیین توالی انجام گرفت. جهت تولید پروتئین gst نوترکیب، ژن مورد نظر در پلاسمید بیانی pet28a همسانه سازی گردید و در باکتری bl21-de3 بیان شد. خالص سازی پروتئین در شرایط طبیعی با روش کروماتوگرافی تمایلی انجام گرفت. پروتئین نو ترکیب جهت تولید آنتی بادی چند همسانه ای به خرگوش تزریق شد. خالص سازی و جداسازی ایمنوگلوبولین ها از سرم خون خرگوش با استفاده از ستون پروتئین a انجام گرفت .آنتی بادی های خالص سازی شده با آلکالین فسفاتاز نشان دار گردیدند. نتایج حاصله از آزمون سرولوژیکی الیزا اختصاصی بودن آنتی بادی های تولیدی را علیه قارچ p. betae تایید نمودند